Одним из путей решения этой проблемы является разработка новых антимикробных препаратов, обладающих целенаправленной местной терапевтической активностью. Это позволит быстро создавать высокие концентрации препарата в ране, снизить вероятность возникновения послеоперационной гнойно-септической инфекции и этим обеспечить большой экономический эффект.
Цель исследования. Оценка противомикробной активности нового отечественного антисептика «Мукосанин» в опытах «in vitro».
Используемые методы. Для достижения поставленной цели использовали препарат «Мукосанин», разработанный в ЗАО «БелАсептика». Новый отечественный антисептик представляет собой прозрачную жидкость, бесцветную или бледно-желтого цвета, без запаха. Его главными действующими компонентами являются полигексаметиленбигуанида гидрохлорид и феноксиэтанол.
Основные механизмы разрушения микробной клетки — деструктивный, мембраноатакующий.
Показания к применению:
- обработка инфицированных ран, поверхностных повреждений кожи, слизистых, мягких тканей, трофических язв, абсцессов, флегмон;
- промывание полостей через дренажные трубки с использованием активного или слепого дренирования;
- обработка операционного поля во время операций, при проведении которых имело место инфицирование — в челюстно-лицевой, абдоминальной хирургии, акушерско-гинекологические, проктологические, урологические, травматологические оперативные вмешательства;
- антисептическая обработка ран, оставленных полностью или частично открытыми после операции;
- обработка ожоговых поверхностей;
- перевязка послеоперационных ран;
- поддерживающая терапия при грибковых заболеваниях кожи;
- антисептические полоскания полости рта при гнойно-септических процессах (ангина, стоматит, гингивит и др.).
Исследования проводились в качественном и количественном суспензионном методах с установлением концентраций препарата и экспозиций, которые оказывали антимикробное действие на стандартные штаммы условно-патогенных бактерий и грибов, являющихся наиболее частыми возбудителями гнойно-септических инфекций в хирургии.
Антимикробную активность препарата изучали на типовых штаммах Staphylococcus aureus АТСС 6538, Escherichia coli АТСС 11229, Pseudomonas aeruginosa АТСС 15412 и Candida albigans АТСС 10231, которые используются во многих странах, в т.ч. и в Республике Беларусь, для оценки антимикробной активности антисептиков и дезинфектантов. Исследования проводили в аккредитованной лаборатории внутрибольничных инфекций ЦНИЛ БГМУ в соответствии с методическими указаниями «Методы испытания противомикробной активности антисептиков профилактического назначения» №11-13-197, утвержденными главным государственным санитарным врачом РБ 16.01.1997 г.[4].
Основные результаты. С помощью качественного суспензионного методов установлены наименьшие бактерио- и фунгицидные концентрации препарата, вызывающие полную гибель типовых штаммов микроорганизмов при различных экспозициях (0,5, 1, 3, 5 минут). Взвеси суточных агаровых культур в физиологическом растворе с 20 % лошадиной сывороткой стандартизировали до 109 КОЕ/мл. Добавляли 0,2 мл взвеси в 1,8 мл раствора антисептика в дистиллированной воде и перемешивали. Через 0,5, 1, 3, и 5 минут смесь нейтрализовали и высевали в пробирки с трилтон соевым бульоном. После инкубирования в термостате при 37°С в течение 48 часов из бульона проводили высев соответствующих тест-микробов на сектора элективных или дифференциально-диагностических сред. Посевы инкубировали в термостате в течение 24 часов и учитывали результаты по наличию или отсутствию роста. Для контроля взвесь тест-культуры смешивали со стерильной водопроводной водой. Дальнейший ход исследования совпадал с вышеописанным. Проведенные качественным суспензионным методом исследования позволили установить, что «Мукосанин» в рабочей концентрации не вызывал полной гибели тестируемых микроорганизмов.
В количественном суспензионном методе для типовых культур определены десятичные логарифмы КОЕ/мл микроорганизмов до и после воздействия антисептика и факторы редукции (RF) для типовых штаммов в опыте по сравнению с контролем. Испытывали антимикробное действие рабочей концентрации препарата, также её 50 % и 75 % концентрации при тех же экспозициях — 0,5, 1, 3 и 5 минут. Приготовление взвеси микроорганизмов, воздействие на них антисептика, нейтрализацию препарата выполняли так же, как и в качественном суспензионном методе. После нейтрализации в течение 10 минут из смеси готовили разведения в стерильном физиологическом растворе до 10~5. По 1мл цельной смеси из пробирки с раствором нейтрализатора, а также разведенной до 10"'~10"5 высевали на чашки с плотной средой для контроля стерильности. Чашки инкубировали в термостате в течение 48 часов при 37°С. Затем подсчитывали число колоний на чашках в опыте и в контроле, число выживших бактерий в опыте, определяли десятичные логарифмы КОЕ/мл в опыте и контроле и факторы редукции (RF) числа бактерий в опыте по сравнению с контролем. Полученные результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1
Оценка антимикробной активности антисептического препарата «Мукосанин» по отношению к типовым штаммам стафилококка, кишечной палочки и синегнойной бактерии
Так, в отношении золотистого стафилококка «Мукосанин» в рабочей концентрации уже через 30 секунд экспозиции проявлял достаточно высокий уровень антимикробной активности (RF>3), который постепенно возрастал с увеличением длительности действия препарата. Близкие величины RF определены и для кишечной палочки. Величины RF для синегнойных бактерий в течение 0,5-1 мин экспозиции были менее 3, но с увеличением длительности контакта с этими микроорганизмами возрастали и составляли при экспозиции 3-5 минут более 3 RF.
Заключение. Препарат «Мукосанин» обладает антимикробной активностью в отношении исследованных штаммов Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и Candida albigans. По величине фактора редукции при экспозициях 0,5-5 мин и концентрациях 100, 75 и 50 % от рекомендованной рабочей дозы он соответствует требованиям, предъявляемым к антисептикам [5].
Литература
- 1. Красильников, А.П. Эволюция признака устойчивости бактерий к противомикробным препаратам и её значение в распространении внутрибольничных инфекций / А. П. Красильников, А. А. Адарченко, Е. И. Гудкова // Совр. пробл. эпидемиологии и эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями: тез. докл. IX съезда работников профилактической медицины Республики Беларусь. — Минск. 1996. — Т. 3 (41). — С. 201-211.
- 2. Адарченко, А.А. Закономерности этиологии внутрибольничных инфекций и принципы их микробиологической диагностики, антимикробной терапии и профилактики / А.А. Адарченко, Е.И. Гудкова, И.Н. Слабко [и др.] // Медицина на рубеже веков: Материалы юбил. науч. конф. посвящ. 40-летию ЦНИЛ БГМУ, в двух частях. — Минск, 2003. — С. 271-275.
- 3. Сивец Н.Ф. Инфекции области хирургического вмешательства в неотложной абдоминальной хирургии: монография/ Н.Ф.Сивец. - Минск: БГМУ, 2007. - 256 с.
- 4. Методы испытания противомикробной активности антисептиков профилактического назначения: метод, указания МЗ РБ / Сост.: Е.И.Гудкова, А.П.Красильников, А.А.Адарченко. — Минск, 1997.— 11 с.
- 5. Petri A. Antiseptische Wundbehandlung mit Polihexamid unter erschwerter Rygienische Bedingungen. Inauguraldissertation zur Erlagung den D.M. — Mainz. — S. 83.
SUMMARY
The antibacterial activity of the new antiseptic "Mucosanin" against the strains of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Candida albigans was examined in the article. The tested medicament meets the standards of antiseptics.